产品简介

本品是一款可直接对不同类型植物叶片进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强。试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解多种植物样品并释放出基因组DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代谢产物等，即可将释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外，样品使用量少，低至1 mm植物叶片即可进行实验。

本试剂盒中提供的2× Plant PCR Master Mix具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率且含有示踪染料，PCR产物可直接电泳。

该试剂盒可用于转基因植株鉴定、植物基因分型等。

产品规格 

组分信息

【注】：*2× Plant PCR Master Mix：包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等，同时包含电泳Loading Buffer，PCR完成之后可直接电泳。

产品储存

1. 试剂N132023-A【Buffer P1】，置于2-8℃保存。有效期1年。

2. 试剂N132023-B【Buffer P2】，中和裂解产物，利于更长时间保存样本，置于2-8℃保存。有效期1年。

3. 试剂N132023-C【2×Plant PCR Master Mix】，-25~-15℃保存，避免反复冻融。有效期1年。

4. 试剂盒有效期1年。

操作注意

1) 做叶片实验时，建议使用新鲜采取的叶片组织，若为长期冷冻组织，需-80℃保存，应尽量避免反复冻融，以免造成模板降解，影响PCR效率。叶片组织以幼嫩为宜，若为成熟的叶片，避免使用叶片主脉部位组织。

2) 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率最佳。

3) 取样时使用打孔器或者刀取适宜大小的样本，样本不同时，打孔器或者刀每次处理样本前需清洗干净。

4) 对于叶片组织，建议取1-10 mm的叶片，过小会使PCR扩增产量低，过多会抑制PCR反应，采用加热裂解法、枪头捣碎、研磨仪破碎的方式处理植物叶片，处理后需震荡离心，务必取上清液试验，沉淀会严重抑制PCR反应。

5) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6) 本产品仅作科研用途！

操作说明

1. 植物叶片

1) 研磨裂解法：

a. 研磨仪破碎：将直径5 mm左右的叶片置于50 μL Buffer P1中，用研磨仪加钢珠（钢珠直径3 mm左右，共2个）破碎叶片（45 Hz，1 min），叶片破碎后溶液呈现绿色，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1 μL用于PCR扩增。

b. 枪头捣碎：推荐使用幼嫩叶片。将直径5 mm左右的叶片置于50 μL Buffer P1中，用枪头将叶片捣碎，捣碎后溶液呈现绿色，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1 μL用于PCR扩增。

2) 加热裂解法：推荐使用幼嫩叶片。将直径5 mm左右的叶片置于50 μL Buffer P1中，95℃加热5-10 min（确保裂解液完全浸没叶片），较难裂解的叶片（老叶片）可适当延长时间（10-20 min），加热裂解后溶液呈现绿色，震荡混匀，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1 μL用于PCR扩增。

3) 直接法：推荐使用幼嫩叶片。使用打孔器或者刀，将直径1 mm左右的叶片直接加入到PCR反应体系中；复杂样本或者是长片段的扩增，推荐使用直径<1 mm的叶片。

2. PCR反应体系

表1. PCR反应体系

【注】：各组分使用前应充分混匀。

1) 模板加入量：小于PCR反应体系的5%，过多会严重抑制PCR反应，强烈推荐加入1 μL模板。叶片直扩优先推荐研磨仪裂解法。

2) 引物终浓度：0.2-0.25 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。

3) 反应体系：推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

4) 体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

5) 对照反应：建议进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

为了更稳定的保存裂解后的模板，将转移出来的上清液，按照裂解产物（DNA模板）：Buffer P2 = 5:1的比例混合，混匀后-20℃保存，稳定保存随时间和样本状态不同而有所不同。如果处理后的植物叶片上清液一周内用于PCR扩增，不用加Buffer P2，上清液请保存在-20℃。

3. PCR反应条件

表2 PCR反应程序

【注】：

1) *退火温度：请参考引物的理论 Tm 值，退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃。

2) **延伸时间：需要根据片段的长度来确定，对于1 kb以内的DNA片段，建议延长时间为1 min。

常见问题与解决方案